焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶(PFP)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶(PFP,EC2.7.1.90)是一種胞質(zhì)酶,廣泛存在于植物組織中,催化果糖-6-磷酸與果糖-1,6-二磷酸之間的可逆轉(zhuǎn)化,在光合作用碳代謝中起重要作用。
測(cè)定原理:
PFP催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為1,6-二磷酸果糖,它在醛縮酶和磷酸丙糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油醛,再由3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提取:
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
3.液體:直接檢測(cè)。