基本信息
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細胞名稱 |
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細胞品牌 |
通蔚生物 |
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細胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞英文 |
AAV293 ; AAV-293 |
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基本形態(tài) |
上皮樣 |
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傳代方法 |
消化3-5分鐘。1 : 2。3天內(nèi)可長滿 |
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培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃ |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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消化時間 |
1分鐘左右 |
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凍存條件 |
無血清細胞凍存液 |
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完全培養(yǎng)基 |
DMEM(高糖)+10%FBS AAV-293 完全培養(yǎng)基 |
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培養(yǎng)環(huán)境 |
37℃，5%CO2，95%AIR |
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供應(yīng)范圍 |
僅供科研使用 |
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特征特性 |
推薦使用AAV-293細胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293細胞株，但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細胞。 跟HEK293細胞一樣，AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個AAV助質(zhì)粒(一個含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。 |
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注意事項 |
收貨如有細胞成團漂浮 , 請參照特殊細胞注意事項的操作 |
細胞操作
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到貨處理 |
1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。 2、將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇二管。 |
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細胞復(fù)蘇 |
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。 2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。 3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 4、隔天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 |
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細胞傳代 |
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次。 2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。 3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
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細胞凍存 |
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次。 2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。 3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液） 4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。 |
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T25細胞到貨處理 |
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觀察 |
1、收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。 |
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處理 |
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。 3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。 4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。 |
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貼壁 |
未超過 80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首-次傳代，建議 1:2 傳代兩個 T25，傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進行對比培養(yǎng)。 |
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細胞注意事項 |
個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。 請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 （注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松) |
售后服務(wù)
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細胞予重發(fā) |
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1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。 |
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2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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細胞不予重發(fā) |
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1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。 |
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2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。 |
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6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。 |