細胞名稱

永生化人肥大細胞系 ; LUVA

細胞品牌

通蔚生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶

細胞英文

Laboratory of University of VirginiA

基本形態

多形型

傳代方法

1 : 2傳代

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

生長特性

 貼壁懸浮混合生長

消化時間

1-2分鐘

凍存條件

無血清細胞凍存液

完全培養基

 SFM/500ml  , L-glutamine(2MM final) , 5ml Pen Strep(10000U/ml)     

培養環境

37℃，5%CO2，95%AIR

供應范圍

僅供科研使用

特征特性

LUVA細胞具有異染色質顆粒，對類胰蛋白酶、組織蛋白酶G和羧肽酶A3有免疫反應。它們表達編碼FcεRI、c-kit、糜酶、類胰蛋白酶、組氨酸脫羧酶、羧肽酶A3和半胱氨酸白三烯1型受體的轉錄本。流式細胞術證實FcεRI、c-kit和FcγRII表達均勻。FcεRI交聯誘導β-己糖胺酶、前列腺素D（2）、血栓素A（2）和巨噬細胞炎性蛋白1β的釋放

注意事項

     懸浮細胞離心收集 , 貼壁細胞消化處理

到貨處理

1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發等問題，請即時聯系。

2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇二管。
特別說明：未與我方聯系擅自復蘇二管出現問題不予售后。

細胞復蘇

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養基重懸，接種 T25 培養瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

4、隔天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

細胞傳代

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。

T25細胞到貨處理

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。

3、不要打開培養瓶蓋，將細胞放入 37 度培養箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態，并按常規貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

半貼壁、半懸浮細胞處理方法

1、該細胞是半貼壁半懸浮生長，懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養使用）。

2、當未超過 80%匯合度時，將離心收集到的懸浮細胞沉淀加入 5ml 完全培養基重懸，加入原培養瓶中，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養。

3、超過 80%匯合度時，將貼壁細胞根據貼壁細胞傳代方法消化、離心、收集；將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用 1-2ml 完全培養基重懸收集到一起，混勻后，按 1:2 進行分瓶傳代（2個 T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進行對比培養。）

（注意：如收到密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養時要將培養瓶蓋子擰松)

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4. 常溫發貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染經核實后，重發。

6. 細胞活性問題在收到產品3天內提出真實實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不予重發

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。